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          • 細胞破碎兩大破碎方法
          • 發布日期︰2018-12-26瀏覽次數︰289
          細胞破碎技術
          破碎方法可規納為機械法和非機械法兩大類。
          機械法
          高壓勻漿破碎法(homogenization)
          高壓勻漿器是常用的設備,它由可產生高壓的正向排代泵(positive displacenemt pump)和排出閥(discharge valve)組成,排出閥具有狹窄的小孔,其大小可以調節。細胞漿液通過止逆閥進入泵體內,在高壓下迫使其在排出閥的小孔中高速沖出,並射向撞擊環上,由于突然減壓和高速沖擊,使細胞受到高的液相剪切力而破碎。在操作方式上,可以采用單次通過勻漿器或多次循環通過等方式,也可連續操作。為了控制溫度的升高,可在進口處用干冰調節溫度,使出口溫度調節在20℃左右。在工業規模的細胞破碎中,對于酵母等難破碎的及濃度高或處于生長靜止期的細胞。
          振蕩珠擊破碎法 (Skaking Bead)
          將等體積的小量組織樣品與高密度的ZircoBeads放入可密封的2ml螺旋蓋微量管中,再加入緩沖液與穩定成份到1.5ml的體積,用6500RPM振湯機高速上下振動8秒,休息8秒,再振動8秒即可。此方法是目前快且一次可處理多樣品的方法。 一台機器多可以在一天處理2400支樣品。對小量且多樣的人很方便。
          高速攪拌珠研磨破碎法(fine grinding)
          研磨是常用的一種方法,它將細胞懸浮液與玻璃小珠、石英砂或氧化鋁等研磨劑一起快速攪拌,使細胞獲得破碎。在工業規模的破碎中,常采用高速珠磨機 。
          超聲波破碎法(ultrasonication)
          超聲波破碎法利用超聲波振蕩器發射的15-25kHz的超聲波探頭處理細胞懸浮液。 超聲波振蕩器有不同的類型,常用的為電聲型,它是由發生器和換能器組成,發生器能產生高頻電流,換能器的作用是把電磁振蕩轉換成機械振動。超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質兩種型式。
          撞擊破碎法
          非機械法
          滲透壓沖擊破碎法(osmotic shock)
          滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細胞內水分便向外滲出,細胞發生收縮,當達到平衡後,將介質快速稀釋,或將細胞轉入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內,引起細胞快速膨脹而破裂。
          凍融破碎法(freezing and thawing)
          將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然後在室溫中融化,反覆多次而達到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結構破裂,從而增加細胞的親水性能,另一方面胞內水結晶,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。
          黴溶破碎法(enzyme lysis)
          黴解是利用溶解細胞壁的黴處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或完全破壞後,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內產物的通透性。溶菌黴(lysozyme)適用于革蘭氏陽性菌細胞的分解,應用于革蘭氏陰性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的黴。
          化學破碎法(chemical treatment)
          采用化學法處理可以溶解細胞或抽提胞內組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學試劑
          去垢劑破碎法(detergents)
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